影片延续前作剧情，故事从“小丑”亚瑟被捕后展开，他在狱中等待着审判日的到来。然而，就在亚瑟与自己的双重人格缠斗之时，他不仅偶遇真爱，甚至还释放出一直潜藏在内心的旋律。

哈莉·奎茵刚刚结束了与小丑的感情。回到哥谭市之后，哈莉·奎茵遇到一个名叫卡桑德拉·凯恩的年轻女孩，她手上有一块属于黑帮老大罗曼·西恩尼斯的罕见钻石，罗曼·西恩尼斯不惜一切代价要夺回这块钻石，并派出了疯狂的连环杀手维克多·扎斯去杀掉卡桑德拉·凯恩。 现在，哈莉·奎茵必须与拥有超能力的歌手黑金丝雀、街头义警女猎手、以及哥谭市警局探员芮妮·蒙托亚一起联手阻止西恩尼斯和他的手下，拯救卡桑德拉·凯恩。